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細胞培養實驗這三個步驟就能搞定!
更新時間:2025-05-21   點擊次數:170次

一、細胞復蘇

將凍存細胞從液氮中取出后,在37C水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移人15ml離心管中,加入10m預熱的DMEM培養基,輕輕吹

勻,離心,2000rpmX2min,棄上清液。

加入10mIDMEM培養基清洗,棄上清液。加入10mIDMEM培養基,輕輕吹打,接種于10cm盤中,在含5%CO2的細胞培養箱中培養。

二、細胞傳代

細胞密度達到80%~90%時,去培養基,10mIPBS清洗2次。加入3mI含0.25%EDTA,放人細胞培養箱3min。加人1mIDMEM

培養基終止消化,轉移至15ml離心管。

加入10mIPBS清洗細胞培養盤,轉移至15ml離心管,2000rpmX2min,棄上清液。再加入10mIPBS(經高壓滅菌,保存于40C),吹

勻,吸取10微升進行計數,按照1×106/盤接種,在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。

三、細胞凍存

細胞密度達到80%~90%時,去培養基,10mIPBS清洗2次。加入3ml含0.25%EDTA,放人細胞培養箱3min。加入ImIDMEM

培養基終止消化,轉移至15ml離心管。加入10mIPBS清洗細胞培養盤,轉移至15ml離心管,2000rpmX2min,棄上清液。

加入Iml凍存液(90%血清,10%DMSO),放入凍存盒內(盒內有異丙醇,以保證溫度降低的速度),立即放入一80C冰箱內,過夜,

第二天放入液氮中,可以保存至少兩年,如不放人液氮,可以保存三個月。

凍存液的配制:70%的培養基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。

進入細胞間開始細胞培養時,必須嚴格按照下列步驟操作:

①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒并檢測沒有問題,不確定的溶液和耗材請勿使用,除非特殊情況,不要借用別人的溶

液。

②確定衣服的袖口已經卷起或者白大褂的袖口已經扎緊。

進入細胞間開始細胞培養時,必須嚴格按照下列步驟操作:

①確定所有的細胞操作用的溶液和耗材都已經消毒并檢測沒有問題,不確定的溶液和耗材請勿使用,除非特殊情況,不要借用別人的溶

液。

②確定衣服的袖口已經卷起或者白大褂的袖口已經扎緊。

③確定酒精燈內的酒精量,需要的話及時進行補充。

④確定所有需要用到的溶液和耗材都放在伸手可及的位置。為了方便單手開啟瓶蓋,實驗開始可以把所有瓶蓋旋松。

③盡量不要直接傾倒溶液,除非瓶口沒有被燒壞。如果傾倒失敗,溶液粘在瓶口,請用噴過75%酒精的紙巾仔細清潔瓶口周圍(不要接

觸到瓶口)后在火焰上簡單燒灼。

操作時如果不能肯定所用的耗材是潔凈的,必須及時更換。

實驗完畢及時收拾,保持工作區域清潔整齊,后用75%酒精清潔臺面。

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